Principios de diagnóstico en microbiología médica

Principios de diagnóstico en microbiología médica Concepto: Comprende el diagnóstico etiológico de las enfermedades infecciosas.

Principios de diagnóstico en microbiología médica, comprende el diagnóstico etiológico de las enfermedades infecciosas mediante la demostración de un agente infeccioso a través de su aislamiento e identificación, y la demostración de respuestas inmunológicas (anticuerpos, reactividad cutánea) en el paciente y la selección racional del tratamiento antimicrobiano sobre la base de las pruebas de laboratorio.

Comunicación entre el médico y el laboratorio

No existe un solo método que permita aislar todos los microorganismos patógenos. El médico debe proporcionar información clínica al laboratorio a fin de que pueda realizarse la técnica más adecuada para aislar determinado microorganismo. Los procedimientos microbiológicos de laboratorio son lentos, ya que se manipulan organismos vivos y no simplemente productos químicos. Teniendo en cuenta que a menudo no es posible retardar el tratamiento en espera de los resultados, es por tanto esencial la obtención de las muestras de productos patológicos antes de iniciarse el tratamiento.

Condiciones generales

Las condiciones generales que debe reunir una muestra de productos patológicos para el examen microbiológico son los siguientes:

1. Obtener suficiente cantidad de la muestra.
2. La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso.
3. Emplear equipo estéril y medidas de asepsia.
4. Transportar inmediatamente la muestra al laboratorio o en su defecto conservarla adecuadamente.
5. Obtener las muestras antes del empleo de drogas antimicrobianas.

Rotular adecuadamente la muestra y acompañarla de la información que se desea así como de los antecedentes clínicos necesarios.

Demostración de un agente infeccioso

Los exámenes de laboratorio generalmente incluyen el estudio microcósmico de materiales frescos teñidos y sin teñir, y la preparación de cultivos bajo condiciones ambientales que sean adecuadas para e crecimiento de una amplia variedad de microorganismo, incluyendo el tipo de organismo que más se sospecha de acuerdo con los datos clínicos. Si el microorganismo es observado o aislado se notifica al médico un informe preliminar. Posteriormente se llevará a cabo la identificación completa mediante pruebas bioquímicas o sexológicas. Finalmente puede probarse la susceptibilidad del microorganismo aislado a las drogas antimicrobianas.

Sangre

En el paciente febril, con o sin síntomas o signos de localización, el hemocultivo es la prueba más útil para demostrar la presencia de infección sistémica. En las personas sanas, los cultivos de sangre obtenidos correctamente permanecen estériles. Aunque ocasionalmente pueden ingresar en la sangre microorganismos de la flora microbiana normal, son eliminados rápidamente por el sistema reticuloendotelial el aislamiento de un microorganismo en un hemocultivo es un hecho de gran valor clínico, siempre y cuando se haya descartado la posibilidad de un error técnico. Los siguientes criterios pueden ayudar a determinar la significación de los microorganismos diferentes:

• Desarrollo del mismo tipo de microorganismo en cultivos repetidos: bacteriana.
• Pequeño número de varios microorganismos diferentes: sugestivo de contaminación.
• Aparición en un solo de varios hemocultivos, de gérmenes de la flora normal de la piel (estafilococos, corinebacterias) :sugestivo de contaminación.
• Los microorganismos relacionados con determinado cuadro clínico son muy factibles de tener significación etiológica (por ejemplo, estreptococos viridans y endocarditis).

Para el examen adecuado de la sangre se deberán seguir los siguientes pasos:

• Recolección apropiada de la muestra.
• Cultivo.

Recolección apropiada de la muestra

Extracción de 10 ml de sangre con jeringuilla estéril y seca, previa limpieza y desinfectación de la piel. Desinfección con yodo y flameado de la superficie de la tapa perforable de un frasco con 100 ml de caldo infusión de corazón. El objetivo es obtener una relación sangre – medio de cultivo de 1:10 a fin de diluir las sustancias con actividad antimicrobiana presentes normal o artificialmente en la sangre. Introducir la sangre extraída en el frasco con caldo y mezclar suavemente. Cuando no pueda llevarse el frasco inoculado inmediatamente al laboratorio o dejarse a temperatura ambiente.

Cultivo

El frasco se colocará en una incubadora a 37 oC. Se hará observación macroscópica diaria y resiembra inmediata a placa de agar sangre cuando se observe turbidez, resiembra al tercer y décimo día aún en ausencia de signos macroscópicos de positividad. Se identifican los crecimientos que se obtengan en las placas de medios de cultivo y se realiza antibiograma a los gérmenes patógenos. En casos especiales, como cuando se sospecha brucelosis, se utilizan medios de cultivos específicos (Ruiz - Castañeda) y la incubación puede prolongarse hasta 30 días.

Líquido cefalorraquídeo

El diagnóstico rápido y preciso de meningitis tiene gran importancia por sus implicaciones en el tratamiento y pronóstico de la enfermedad. Es muy urgente la diferenciación entre la meningitis bacteriana purulenta y la meningitis no bacteriana. La decisión inmediata se basa en el examen citoquímico del LCR (número y tipo de células, contenido en glucosa) y en la búsqueda microscópica de microorganismos. Las bacterias que más frecuentemente causan meningitis son el neumococo, el meningococo y el Haemophilus influenzae, esta última sobre todo en niño.

Recolección de la muestra

Se recogerá el LCR mediante punción lumbar practicada con precauciones de asepsia. Se recogerá un tubo estéril, teniendo cuidado de evitar el humedecimiento de los tapones si son de algodón. La muestra deberá procesarse de inmediato, las que sean tomadas fuera del horario de trabajo del laboratorio serán conservadas a 37 oC. todas las muestras serán centrifugadas y decantadas.

Examen microscópico

Luego que la muestra es centrifugada y decantada con el sedimento se procede a realizar el examen que donde se hacen frotis que se tiñen por la coloración de Gram y ocasionalmente por la de ZIL – Neelsen, esta última tinción está particularmente indicada si se forma una película en la superficie del LCR, que atrapa los microorganismo acidorresistentes. Los criptococos son hongos levaduriformes encapsulados que reobservan mejor en preparaciones de tinta china.

Cultivo

El sedimiento se siembra en una placa de agar chocolate que se incuba a 37 oC en una atmósfera de – 10 % de CO2. Se identifican los crecimientos obtenidos y se realiza antibiograma a los gérmenes patógenos.

Orina

El examen bacteriológico de orina se hace cuando hay signos o síntomas de infección de vías urinarias, insuficiencia renal o hipertensión de vías urinarias. La orina excrementada por el riñón y la de la vejiga son estériles. Sin embargo, la uretra contiene una flora microbiana normal que contamina la orina a su paso, de tal manera que la orina por micción espontánea contiene un pequeño número de bacterias. Debido a que es necesario distinguir los contaminantes de los organismos etiológicamente importantes, sólo el examen cuantitativo de orina puede dar resultados significativos.

Recolección de la muestra

Debido al peligro de introducir microorganismos en el interior de la vejiga, la caracterización debe evitarse siempre que sea posible. Se pueden obtener muestras satisfactorias por micción natural, limpiando los genitales con agua y jabón, y colectando la orina a la mitad de la micción en un recipiente estéril. Debe preocuparse recoger la primera orina de la mañana, a fin de que los microorganismos hayan tenido tiempo de multiplicarse en la vejiga. Si la muestra no se puede enviarse de inmediato al laboratorio o su transporte va a demorarse, se deberá conservar la orina en refrigeración.

Urocultivo cuantitativo

Se siembra una cantidad medida de orina en la superficie de una placa de agar sangre y el número de colonias que aparezcan se cuentan para obtener el número de bacterias por ml, después de multiplicarse por el factor de dilución. Se acepta que la presencia de más de 100 000 microorganismos por ml a partir de una muestra de orina colectada correctamente, constituye una fuerte evidencia de menos bacterias, se considera dudoso el examen y está indicado repetirlo. Cuando se encuentran menos de 10 000 bacterias, ya que se considera que proviene de la flora normal o son contaminantes.

Demostración de anticuerpos específicos

En el curso de muchas infecciones se adquieren anticuerpos séricos en forma relativamente precoz, a medida que se multiplican los microorganismos, que pueden persistir por meses o años. La demostración sexológica de un anticuerpo indica exposición efectiva (por infección o vacunación) en alguna época del pasado, pero puede no tener relación con la enfermedad actual. Para el diagnóstico de una infección es frecuentemente necesario demostrar un aumento significativo en la concentración de anticuerpos, es decir, una elevación en el título de anticuerpos en la segunda de dos muestras de sangre obtenidas con un intervalo de 15 – 20 días.

Fuente

• Ortega Verdecia, Dres. Bruno, Macola Olano, Silvia. Microbiología, Guía de estudio, 1981.