Reactivos fijadores
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Reactivos fijadores. Son aquellos reactivos que coagulan las materias albuminoideas de los tejidos, haciendo inalterable la forma y estructura de las células. Se puede decir que con estos reactivos se logra "fijar", preservar o conservar las estructuras de los tejidos, las cuales quedan lo más aproximadas a las que tenían en vida. Sin embargo, siempre sufren variaciones morfológicas y disminución de volumen, perdiendo hasta el 40% del tamaño original.
Entre las células vivas y las fijadas existen diferencias: el citoplasma muestra diferentes estructuras según el reactivo fijador usado. El proceso de fijación es imprescindible en la conservación de la célula, ya que estando muerta se descompone rápidamente, y por medio de la fijación se detiene la putrefacción. Por otra parte, existen porciones del citoplasma donde hay determinadas estructuras que sólo son visibles después de la fijación, a causa del cambio de índice de refracción generalmente.
Ningún fijador conserva igualmente todas las estructuras de la célula, por lo que es necesario utilizar distintos fijadores de acuerdo con la estructura que se desean estudiar u observar.
Sumario
Condiciones
Un buen fijador debe colocar las piezas o tejidos en situación de poder sufrir las siguientes operaciones técnicas que le comunican un aumento de resistencia o dureza adecuada. Generalmente los mismos reactivos fijadores son indurantes, tales como el formol al 10%, el Alcohol Etílico absoluto, el bicromato potásico, etcétera. Por otro lado el fijador debe actuar como mordiente, conservando el más alto grado de apetencia colorante de las estructuras celulares.
Debe de tener, además, un alto poder de difusión o de penetración, a fin de detener rápidamente la putrefacción de la célula, llegando pronto a todas las partes del tejido. La rapidez de difusión varía según los fijadores y según los órganos. Se ha comprobado que en el mismo tiempo el formol penetra más profundamente en el tejido que en el ácido ósmico. También se ha comprobado que añadiendo ácido acético a estos reactivos se facilita su penetración o difusión.
Duración
El tiempo que debe de permanecer la célula o el tejido dentro del fijador depende de varios factores, especialmente en las estructuras de las células y los órganos, y de la naturaleza del fijador, así como del tamaño de la pieza que se desea fijar.
No debe de sacarse las piezas del fijador antes de tiempo, ni conviene prolongar indefinidamente la acción del fijador, pues el material se haría quebradizo al efectual los cortes con el micrótomo en el caso de los tejidos, y, demás, dificultaría la coloración ulterior. Solamente el alcohol etílico al 80% o el formol al 10% fijan y conservan indefinidamente la pieza.
Pasado el tiempo de fijación es imprescindible someter la pieza a un lavado en agua abundante para arrastrar el fijador, aunque en algunos casos el lavado se hace con alcohol.
Tamaño de la pieza
Las dimensiones de la pieza dependen de la clase de estudio que se quiera realizar (citológico, topográfico o anatomopatológico). Si lo que se desea es estudiar la célula basta conque la pieza alcance uno o dos milímetros de espesor, para luego hacer los cortes con el micrótomo; pero si el estudio será topográfico el tamaño dependerá del órgano de que se trate, aunque el espesor no debe sobrepasar los cinco milímetros.
Comoquiera que el fijador se empobrece a medida que se fijan las piezas, debe unirse un volumen del líquido fijador adecuado. En general, el volumen de unas treinta o cuarenta veces el tamaño de la pieza es suficiente para cualquier fijador.
Temperatura
El frío retarda la fijación y el calor lo acelera. Aunque la fijación suele realizar a la temperatura ordinaria, ha quedado demostrado que si se sumerge la pieza en formol al 10% en ebullición por 5' es más que suficiente. Algunos autores no recomiendan el uso de líquidos en ebullición.
Ver además
Enlace externo
- Artículo: Fijación de muestras biológicas. Consultado: 14 de noviembre de 2012.
Fuente
- De la Torre y Callejas, Salvador Luis. Manual básico de microtecnia biológica. Edición Revolucionaria. Instituto Cubano del Libro. La Habana, 1975. pp.93-96.
